在使用底物时，要确保避光保存。 吸取液体时，动作要缓慢，避免产生气泡，以保证吸取量的准确性。 使用与所需量程接近的移液枪吸取液体，以减少误差。 向酶标孔中加入液体时，避免枪头与孔内液体接触，而是让枪头上的液滴沿着孔壁自然流下。
要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
底物在实验过程中需避光保存。 使用移液器吸取液体时，速度不宜过快，避免产生气泡导致吸取量不准确。 使用量程与所需量接近的移液器吸取液体，以减少误差。 将液体加入酶标孔时，避免枪头接触孔内液体，而是让枪头上的液滴与孔壁接触，液滴会自然流下。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证时间精确，一个人一次不宜多于两块板同时操作、测定。 洗涤 洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。
首先你要明确你要测的样品的表达情况，如果低的话那你就得可以先用一两个孔，把你的样品原液稀释为一倍，五倍，做个预实验不用去测荧光表达，在加完终止液后直接观察颜色加好，然后确定你样品检测时的浓度。。
可以先做一个较大范围几个样品稀释度来检测，比如，10倍，100倍，1000倍等。看那个稀释度落到线性范围。然后根据这个结果调整稀释倍数。
分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
确保移液枪的准确性，误差不应超过2%。可以通过水和电子天平进行校准，最好由专业人员进行。 准备20ul、50ul、100ul、1000ul以及排枪各一支。每次吸取不同液体后，务必更换枪头，即使是吸取标准品时也是如此。
ELISA测定中试剂准备 实验前应将试剂盒从冰箱中取出，室温下放置20分钟以上以达到室温。直接使用冰箱中的试剂盒可能导致弱阳性样本出现假阴性。此外，洗板用的洗液需每日更换，稀释时使用的蒸馏水或去离子水质量必须保证。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
ELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意的一些问题。ELISA实验通用规则 要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。
在早期的间接法ELISA中，有些作者定出S/N为阳性标准，现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应注意的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，以致反应后产生的本底可能较正常人血清的本底低得多。
该方法需要提供原始数据。ELISA原始数据包括实验组和对照组的样本数据，以及样本的比值或浓度等数据。这些数据是实验分析的基础，需要通过实验获得，并经过正确的统计学处理和分析，才能得出可靠的结论。原始数据需要妥善保存，以便后续的复查或其他研究使用。
elisa原始数据是需要提供的。elisa一般分为实验组和对照组，以及按比值分组，所以有三个变量（可能每个人的实验不一样，我是做CART和肿瘤细胞共培养后收集细胞因子上清液检测）：细胞因子浓度（定量数据）、比值（等级数据，也就是半定量数据，我的为5：1，10：1两个比值）、组别（定性数据）。
首先收集ELISA实验的所有数据，对每个孔的吸光度值进行背景校正。然后根据标准曲线，将修正后的吸光度值转化为样品的浓度。最后将数据转化为柱状图、折线图等形式即可。
ELISA就是我们常说的酶联法。现在国内最差也是用3代试剂，有些地方会用4代试剂。4代试剂（检查抗原+抗体）——窗口期为4周。因为抗原于3-4周达到复制的峰值，此时通过4代试剂检查，如果感染了HIV，抗原/抗体至少有一个为阳性，如果都是阴就排除了。3代试剂（只查抗体）——窗口期为6周。
浓洗涤液可能会有结晶，使用前可在水浴中加温助溶。 加样、洗涤和显色等步骤都应使用加样器，并经常校对其准确性。 对照品的使用有助于检验试验的有效性和判断结果。--- 以上改写内容在保留原始信息的基础上，提升了语言表达的准确性和专业性，同时确保了条目的清晰和逻辑性。
